روش fish چیست؟

Leyenda

Well-known member
سلام
کسی راجع به روش fish میتونه برام توضیح بده؟؟
ممنون ...
 

jo-boy

New member
اگه منظورتون همون فیش ایمونولوژیه من اینو خدمتتون میگم
FISH همان Fluressent in-situ hybridization میباشد که معنی لغوی اون میشه "دورگه سازی در محل فلئورسنت" ..
این فن کاربرد گسترده ای در بالین دارد.پروب DNA با یک فلوئروکروم نشاندار می شه و پس از دو رگه سازی با نمونه های فرد مبتلا توسط یک میکروسکوپ فلوئورسنت امکان مرئی شدن ناحیه را که در آن دورگه سازی صورت گرفته است فراهم می شود.
یعنی اون ناحیه به صورت نقطه ای شفاف نمایان میشه (تصور کنید مثلا جفت کروموزوم 22 رنگی خاص به خود میگیرد)
 

Leyenda

Well-known member
Fluorescence in situ hybridization یا همان FISH یکی از متدهای هیبریدیزاسیون یا همان دورگه سازی است . بطور کلی ۳ نوع هیبریدیزاسیون وجود دارد :
۱- ساترن بلاتینگ ( شناسایی توالی های DNA یا کروموزوم توسط قطعات DNA شناخته شده یا سنتز شده که پروب نام دارند)
۲- نورترن بلاتینگ ( شناسایی توالی های RNA توسط قطعات DNA شناخته شده یا سنتز شده که پروب نام دارد)
۳- وسترن بلاتینگ ( شناسایی پروتئین ها توسط آنتی بادی های منوکلونال و پلی کلونال کاملا اختصاصی) این روش از روش ها تائیدی برای HIV است.
FISH یا هیبریدیزاسیون درجا جزء روش های ساترن بلاتینگ است که با استفاده از پروب های اختصاصی از جنس DNA که متصل به مواد فلورسنت است قطعات DNA مربوط به باکتری های و ویروس ها و یا حتی قسمت های از کروموزوم و ...را شناسایی کرد. بعنوان مثال پروب هایی وجود دارند که اختصاصی برای شناسایی DNA مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد استفاده قرار می گیرند و چون این تکنیک برخلاف سایر روش های هیبریدیزاسیون ساده تر و آسان تر انجام می شود و مستقیم بر روی نمونه صورت می گیرد نام هیبریدیزاسیون در جا یا insitu را به خود اختصاص می دهد.
 

Leyenda

Well-known member
تشخيص پيش از تولد اختلالات کروموزومی با استفاده از روش هيبريديزاسيون فلوئورسنت درجا (FISH) کاربردهای فراوانی دارد. از روش FISH می*توان برای تشخيص انيوپلوئيدی*های شايع کروموزوم*های ۱۳، ۱۸، ۲۱، X وY استفاده کرد. هم*چنين، از اين روش برای تشخيص کروموزوم*های نامتعادل حاصل از حذف يا جابه*جايی*هايی که در فرزند پيشين يا پدر و مادر شناسايی شده باشند، استفاده می*شود. روش FISH در تأييد وضعيت*های موزاييک نيز جايگاه خاصی دارد، زيرا امکان شمارش تعداد زيادی سلول را فراهم می*کند


هدف: دو رگ گيري فلوئورسانس درجا (FISH)، شناسايي تواليهاي خاص با طولهاي متفاوت را در نواحي کروموزومي يا کل کروموزوم در سلولهاي اينترفاز يا متافاز ميسر مي سازد. پيشرفتهاي جديد در اين فن آوري موجب نقشه برداري سريع و تعيين موقعيت قطعه هاي DNA بر روي يک باند کروموزوم متافازي مي شود. روش FISH مبتني بر چند مرحله است که شامل آماده سازي و نشاندار کردن پروب، دو رگ گيري پروب و آماده سازي کروموزوم و آشکارسازي نشانه ها و تصويرگيري است. در اين تحقيق با استفاده از اين روش سلولهاي لنفوبلاستوييدي اتاکسي تلانژکتيازي (A-T) که به عوامل کلاستوژن و موتاژن فيزيکي و شيميايي حساسيت بيشتري نسبت به سلولهاي نرمال نشان مي دهند مورد بررسي قرار گرفت.
نوع مطالعه: مطالعه تجربي
مواد و روشها: سلولهاي A-T و نرمال در محيط RPMI-1640 کشت داده شد و تحت تابش اشعه گاما در مرحله G1 و G2 چرخه سلول قرار گرفت. پس از تيمار با دموکلسين و آماده سازي متافازها به روش استاندارد، لام ميکروسکوپي تهيه شد. براي بررسي کروموزومهاي ۱، ۴، ۷ و ۱۴ اين سلولها با استفاده از پروب کروموزوم کامل روش FISH انجام شد. براي هر نمونه با استفاده از ميکروسکوپ فلوئورسانس Zeiss متصل به رايانه حداقل ۵۰ متافاز مورد بررسي قرار گرفت.
يافته ها: مشاهدات مبين آن است که فراواني ناهنجاريهاي کروموزومي در سلولهاي A-T و نرمال قبل و بعد از تابش گيري براي کروموزومهاي مورد بررسي به طور کلي کم بوده است. به هر حال رخداد فراواني بيشتر آسيبهاي کروموزومي در سلولهاي A-T شامل جا به جايي، تريزومي، جا به جايي روبرتسوني و شکست کروماتيدي مشهود است.
نتيجه گيري: در روشهاي متداول سيتوژنتيکي، مشاهده تغييرات متفاوت کروموزومي هميشه با انجام يک روش ميسر نيست. حساسيت آشکارسازي روش FISH به کروموزومهاي رنگ آميزي شده محدود مي شود اما همانگونه که براي سلولهاي A-T مشاهده شد، FISH يکي از موثرترين روشهاي بررسي انواع تغييرات کروموزومي پايدار و ناپايدار محسوب مي شود. اين روش نه تنها مي تواند کاربرد گسترده اي در نقشه برداري ژنوم انسان و ديگر ارگانيسمها داشته باشد، بلکه مي تواند در سيتوژنتيک باليني، ژنتيک سلولهاي سوماتيک، تشخيص سرطان و بررسي هاي بيان ژن نقش مهمي داشته باشد.
 
بالا