ساترن بلاتینگ (Southern blot) و کونتیگ (contig)؟
- نویسنده موضوع arshadbio
- تاریخ شروع
BioScientist
New member
ساترن بلات
ساترن بلات یکی از روش هایی است که برای آنالیز DNA استفاده میشه. در ابتدا DNA توسط آنزیم های محدودکننده برش داده شده و قطعات DNA شکل می گیرند. سپس این قطعات را روی ژل آگاروز قرار داده و الکتروفورز انجام می دهند. بدین ترتیب قطعات DNA بر اساس تفاوت در اندازه شون از هم جدا می شوند. در مرحله بعد قطعات DNA روی ژل به وسیله تیمار با قلیا دناتوره شده (دو رشته DNA از هم جدا می شوند) و تک رشته ای می شوند. در مرحله بعد که Transfer (انتقال) نامیده می شه DNA روی ژل را به کاغذ صافی نیتروسلولوزی منتقل می کنند.در این مرحله پروب نشاندار(تک رشته DNA نشاندارشده با ماده رادیواکتیو مثل فسفر32) را اضافه می کنند. بدین ترتیب بین توالی های مکمل DNA و پروب جفت باز شکل می گیره یا به عبارتی هیبریداسیون انجام میشه و در نهایت شست شو صورت می گیره تا پروب هایی که هیبرید نشدند خارج شوند. بعدهم اتورادیوگرافی انجام میشه، چون پروب نشاندار بوده، با اتورادیوگرافی توالی موردنظر DNA رو در بین مجموعه قطعات مون مشخص می کنه.
ساترن بلات یکی از روش هایی است که برای آنالیز DNA استفاده میشه. در ابتدا DNA توسط آنزیم های محدودکننده برش داده شده و قطعات DNA شکل می گیرند. سپس این قطعات را روی ژل آگاروز قرار داده و الکتروفورز انجام می دهند. بدین ترتیب قطعات DNA بر اساس تفاوت در اندازه شون از هم جدا می شوند. در مرحله بعد قطعات DNA روی ژل به وسیله تیمار با قلیا دناتوره شده (دو رشته DNA از هم جدا می شوند) و تک رشته ای می شوند. در مرحله بعد که Transfer (انتقال) نامیده می شه DNA روی ژل را به کاغذ صافی نیتروسلولوزی منتقل می کنند.در این مرحله پروب نشاندار(تک رشته DNA نشاندارشده با ماده رادیواکتیو مثل فسفر32) را اضافه می کنند. بدین ترتیب بین توالی های مکمل DNA و پروب جفت باز شکل می گیره یا به عبارتی هیبریداسیون انجام میشه و در نهایت شست شو صورت می گیره تا پروب هایی که هیبرید نشدند خارج شوند. بعدهم اتورادیوگرافی انجام میشه، چون پروب نشاندار بوده، با اتورادیوگرافی توالی موردنظر DNA رو در بین مجموعه قطعات مون مشخص می کنه.
Dr.passtor
New member
دوست عزیز جسارت نباشه سعی کنین خودتون تو کتاب ها دنبال چنین مطالبی باشین. چون خیلی خوبتر یاد میگیرین. امری ساترن و نورترن رو خیلی خوب توضیح داده. البته یدونه دیگه بنام وسترن داریم که تا اونجایی که من امری رو مطالعه کردم ندیدم.در ضمن از دوستی که ساترن رو توضیح دادن تشکر میکنم. ولی برای یاد گرفتن کانتیگ، باید از مبنا بعضی چیزارو بلد باشین. ولی باز در حد توان خود توضیح خیلی مختصری رو عرض میکنم.
کانتیگ، مجموعه کلون هایی است که واحدهای الحاقی اون کلون با واحدهای الحاقی کلون همسایه هاش همپوشانی داشته باشه.
نکات مهم مربوط به کانتیگ (البته تا اونجایی که حضور ذهن دارم و به نظر من مهمه):
کانتیگ ها خطی هستند.
این ترتیب خطی با موقعیت های زیرکروموزومی مطابقت دارند.
جهت نقشه یابی در تعیین توالی کاربرد دارد.
و اما نکته مهم. چه زمانی تشکیل میشود و یه با عبارت دیگر چه زمانی همپوشان میشوند؟ هنگام ساخت کتابخانه های dna ژنومی.
امیدوارم کمک کرده باشم. ولی عرض کردم باید از قبل بعضی چیزارو بلد باشی تا جا بیوفته. موفق باشین
کانتیگ، مجموعه کلون هایی است که واحدهای الحاقی اون کلون با واحدهای الحاقی کلون همسایه هاش همپوشانی داشته باشه.
نکات مهم مربوط به کانتیگ (البته تا اونجایی که حضور ذهن دارم و به نظر من مهمه):
کانتیگ ها خطی هستند.
این ترتیب خطی با موقعیت های زیرکروموزومی مطابقت دارند.
جهت نقشه یابی در تعیین توالی کاربرد دارد.
و اما نکته مهم. چه زمانی تشکیل میشود و یه با عبارت دیگر چه زمانی همپوشان میشوند؟ هنگام ساخت کتابخانه های dna ژنومی.
امیدوارم کمک کرده باشم. ولی عرض کردم باید از قبل بعضی چیزارو بلد باشی تا جا بیوفته. موفق باشین